Інфекційна діагностика методом ПЛР. Ціни, відгуки, рейтинги
Актуальність ПЛР діагностики
ПЛР відноситься до надчутливих методів діагностики. Вона дозволяє отримувати точні результати дослідження у найкоротші терміни після взяття зразка. За допомогою цього методу фахівцям вдається діагностувати наявність збудників, які можуть бути присутніми в організмі пацієнта, не вдаючись до трудомістких мікробіологічних методів. З іншого боку, з допомогою ПЛР діагностики можна визначити збудника інфекції в інкубаційний період, коли відсутні зовнішні прояви захворювання. Це дозволяє своєчасно розпочати лікування. ПЛР діагностика є досить актуальною в урології та гінекології, особливо при виявленні інфекцій, що передаються статевим шляхом.
Крім медичної діагностики, ПЛР застосовується у таких ситуаціях:
- у кримінальних розслідуваннях;
- для встановлення спорідненості;
- у персоналізованій медицині;
- для клонування генів;
- у мутагенезі.
У криміналістиці ПЛР застосовується з метою визначення про генетичних відбитків. Матеріал, відібраний дома подій, порівнюють із матеріалом обвинувачуваного. Для аналізу застосовують будь-яку біологічну рідину – кров, сперму, сечу, слину, а також фрагменти тканин – волосся, епітеліальні клітини.
Батьківство встановлюють, проводячи кілька порівнянь, що пояснюється унікальністю генетичної інформації.
Попереднє генотипування, що застосовується в персоналізованій медицині, дозволяє встановити наявність рецепторів та ступінь їхньої чутливості до ліків. Це значно полегшує вибір медикаментозних засобів для конкретного пацієнта. Метод ефективний стосовно пацієнтів, які мають сприйнятливість фармакологічних препаратів зумовлена генетичними особливостями.
Застосовуючи клонування генів, вченим вдається отримати велику кількість однакових ділянок ДНК. Надалі їх застосовують у генній інженерії. Проведення мутагенезу за допомогою ПЛР набуло широкого поширення в експериментальній медицині, селекційній діяльності, під час виробництва медичних препаратів.
Процес проведення діагностики методом ПЛР
Про особливості підготовки в кожному конкретному випадку пацієнта інформує лікар. Але є кілька загальних принципів, яких слід дотримуватись усім пацієнтам, спрямованим на ПЛР.
Обстеження необхідно проводити на початок прийому антибактеріальних препаратів. За 2-3 доби до взяття матеріалу необхідно утриматися від статевих контактів. У цей час не можна застосовувати контрацептиви місцевої дії, протимікробні вагінальні свічки і таблетки, спринцювання. Після кольпоскопії, гінекологічного огляду, вагінального УЗД має пройти щонайменше три доби. Оптимально, якщо мазок буде взято у середині циклу. І жінкам, і чоловікам не можна мочитися за три години до обстеження.
Діагностика інфекцій методом ПЛР починається із забору спеціалістом матеріалу, який підлягає дослідженню. Його поміщають у спеціальний невеликий контейнер із фізіологічним розчином та направляють у спеціальну лабораторію – ПЛР.
Суть ПЛР діагностики полягає в ампліфікації - процесі відтворення великої кількості копій ДНК. Побудова ДНК відбувається за принципом комплементарності. Що це означає? ДНК складається з чотирьох нуклеотидів - аденіну, тиміну, гуаніну, цитозину. Через особливості хімічної будови аденін може поєднуватися тільки з тиміном, гуанін - з цитозином. ДНК кожного організму – індивідуальна. Виявивши невелику її ділянку, можна з упевненістю встановити, кому саме вона належить.
Дослідження у лабораторії проходить у кілька етапів:
- виділяється ДНК;
- ДНК фрагменти амліфікуються;
- проводиться детекція ДНК-продуктів ампліфікації.
Якщо розглядати дуже спрощено, весь хід ПЛР діагностики полягає в наступному. Спочатку ДНК-матрицю, тобто ДНК, яку потрібно ідентифікувати, нагрівають до певної температури. Це необхідно для того, щоб двоспіральна молекула розпалася на окремі ланцюги. Ця фаза називається денатурацією.
Наступна фаза діагностики – відпал. Після денатурації дослідник одержує окремі ланцюги молекули ДНК. Потім знижують температуру. До початку та кінця ланцюжка приєднуються праймери – короткі фрагменти нуклеїнових кислот. Вони позначають початок та кінець ділянки, яку потрібно ампліфікувати.
Після цього розпочинають свою роботу ферменти - полімерази. Вони будують недостатню частину молекули таким чином, що на виході дослідник отримує типову двоспіральну молекулу нуклеїнової кислоти. Цей процес, званий реплікацією, здійснюється за правилом комплементарності, про яке згадувалося вище. Це остання фаза ПЛР – елонгація.
Потім слідує етап ідентифікації ДНК. Це діагностика інфекції. Вона здійснюється за допомогою електрофорезу або мічених праймерів. У першому випадку нитки ДНК лінізують, тобто «розкручують» спіраль, щоб вона набула лінійної форми. Під впливом електричного поля молекули здатні мігрувати від катода - електрода, зарядженого негативно, аноду - електроду, зарядженому позитивно. Реакція відбувається у спеціальному агарозному гелі. Чим довша нитка ДНК, тим нижча швидкість її пересування. Розмір нитки встановлюють, порівнюючи її із зразком. Кількість визначається за яскравістю свічення після обробки спеціальними речовинами.
Якщо для діагностики інфекції використовують мічені праймери, після завершення ПЛР до отриманого продукту додають хромоген - спеціальна речовина, яка при впливі з ферментами забарвлює матеріал. Зміна забарвлення свідчить про наявність збудника інфекції у матеріалі.
Крім звичайної ПЛР, лабораторіям є багато її різновидів. До основних із них належать:
- вкладена діагностика, за якої застосовують дві пари «затравок»;
- інвертована - застосовується в тих ситуаціях, коли відома невелика ділянка, що знаходиться всередині молекули. І тут реакція йде від центру до краях;
- ПЛР з реверсною транскрипцією;
- асиметрична полімеразна ланцюгова реакція - дозволяє отримати копії одного з ланцюгів молекули; діагностика інфекції кількісної ПЛР завдяки використанню мічених праймерів можна виміряти кількість отриманого продукту;
- ступінчаста діагностика - характеризується зміною температури у фазі відпалу;
- полімеразна ланцюгова реакція в гелі - дає можливість одержати колонії молекул на поверхні акриламідного гелю;
- ПЛР довгих фрагментів;
- полімеразна ланцюгова реакція поліморфної ДНК - застосовується для розрізнення генетично близьких організмів.
Показання
Проводити ПЛР діагностику інфекцій пацієнтам необхідно у таких випадках:
- за наявності зовнішніх симптомів, що вказують на інфекцію, що передається статевим шляхом;
- після незахищеного статевого акту з новим партнером;
- при хронічних запальних захворюваннях сечостатевої системи - для діагностики інфекції, що стала їх причиною;
- при ускладненій вагітності;
- при передчасних пологах, мимовільних абортах, найчастіша причина яких – інфекція;
- для діагностики інфекцій, які можуть бути причиною безпліддя;
- для визначення чутливості до антибактеріальних препаратів;
- контролю ефективності лікувального процесу.
Розшифровка аналізу
Негативний результат при діагностиці інфекцій методом ПЛР вказує на те, що досліджуваний матеріал не має жодних слідів інфекційних агентів. Відповідно, пацієнт, який здав аналізи, є здоровим. Позитивний результат полімеразної ланцюгової реакції вказує на наявність слідів інфекції в досліджуваній пробі.
Трапляється, що результат ПЛР діагностики інфекцій виявляється позитивним, але активної інфекції в організмі пацієнта немає. Такий випадок говорить про «здорове носійство», яке не вимагає і не піддається лікуванню.
Ціни та клініки
ПЛР діагностика проводиться кваліфікованим лікарем-венерологом. Пройти ПЛР діагностику пацієнти зможуть у сучасних медичних центрах. Вибрати відповідну клініку ви зможете, скориставшись інтернет-сервісом.
Схожі новини:
